一、实验原理
油红O（Oil Red O）脂肪染色法是一种常用于检测组织或细胞内脂肪情况的方法。油性红O是一种脂溶性染料，具有很强的脂溶剂和染脂剂特性。其染色原理基于油性红O与组织或细胞内的中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白的特异性吸附作用，从而使脂肪能够被染色。
在油红O染色的过程中，染料能够高度溶解于脂肪内部。当染料溶液加入到组织切片或细胞样品中时，染料会从有机溶剂转移至组织或细胞内的脂质中。这种转移过程导致组织内的脂肪结合油性红O染料而呈现红色。油性红O染色方法可用于分析细胞样品中脂质的状况。通过显微镜观察，可以清晰地看到染色的脂肪滴，从而评估细胞内脂质的含量、分布和形态。这项技术在研究脂质代谢、肥胖症、心血管疾病等领域中具有广泛的应用。
二、实验步骤
1、弃去培养基，用PBS洗涤两次，再将油红O固定液添加至培养皿中固定30分钟（可考虑延长时间）。
2、制备油红O染液，将储备液5%油红O染液与蒸馏水按3:2稀释。
3、调配60%异丙醇，将6毫升异丙醇与4毫升蒸馏水混合。
4、倒掉固定液，用蒸馏水洗涤两次。
5、加入60%异丙醇浸泡20秒（不要浸泡太久）。
6、在去除60%异丙醇后，加入新配制好的油红O染色液，浸泡20分钟。目的是使油红O从60%异丙醇中转移到脂质中，从而使脂肪滴呈现出红色。
7、弃去染色液，用60%异丙醇漂洗20秒至清晰。使用蒸馏水洗涤2-5次，直至无多余染料。
8、加入苏木素染色液，对细胞核进行1-2分钟的复染。清除染色液后，使用蒸馏水洗涤5次。
9、将细胞浸泡1分钟于油红O缓冲液中，然后倒掉。
10、加入蒸馏水以覆盖细胞，然后在显微镜下观察和拍摄图像。
11、使用软件Image J软件分析油红染色中的脂滴面积比。
三、注意事项
1、建议在实验设计中设计阴性对照和阳性对照。例如，可以选择脂质丰富的肝脏组织作为阳性对照样本，而针对阴性对照则可参考文献选择无脂肪沉积的组织样本。这样的设计有助于验证染色结果的准确性和可靠性，确保所观察到的油红O染色效果与预期一致。
2、染色结果应尽快观察及拍照，不能长期保存。
3、油红O用于染色脂质物质，但由于石蜡切片处理过程中无法保留脂质物质，因此石蜡切片不能进行油红O染色。
4、在进行油红染色时，需要轻柔操作，因为脂滴容易移位。
5、苏木素复染时间不能过长。
