一、未提取到DNA
1.问题分析：
样本质量不佳，如样本老化、降解或含有抑制物。
裂解不充分，未能有效释放DNA。
漂洗液中未添加无水乙醇或异丙醇，导致DNA无法沉淀。
2.解决方案：
选择新鲜、高质量的样本。
优化裂解条件，如延长裂解时间、增加裂解液用量或采用更有效的裂解方法。
确保在漂洗液中加入指定量的无水乙醇或异丙醇。
二、DNA产量低
1.问题分析：
样本量不足或含有DNA的细胞数量少。
裂解不充分，导致DNA释放不完全。
洗涤或纯化过程中DNA丢失。
2.解决方案：
增加样本量或选择富含DNA的细胞类型。
优化裂解条件，确保DNA充分释放。
在洗涤和纯化过程中，小心操作，避免DNA丢失。
三、DNA纯度低
1.问题分析：
样本中含有蛋白质、多糖、多酚等杂质。
提取过程中引入了外源DNA酶或RNA酶。
洗涤不彻底，导致杂质残留。
2.解决方案：
在提取过程中加入蛋白酶K等酶类，去除蛋白质杂质。
使用高质量的试剂和耗材，避免引入外源酶。
增加洗涤次数或使用更有效的洗涤方法，确保杂质彻底去除。
四、DNA降解
1.问题分析：
样本在提取前未妥善保存，导致DNA降解。
提取过程中操作过于剧烈，导致DNA机械断裂。
提取过程中引入了DNA酶。
2.解决方案：
样本采集后应尽快处理或妥善保存于低温条件下。
提取过程中操作应轻柔，避免剧烈振荡或吹打。
使用高质量的试剂和耗材，避免引入DNA酶。
五、DNA片段长度小于预期
1.问题分析：
DNA在提取过程中发生降解。
裂解或纯化过程中使用了不适当的条件，导致DNA剪切。
2.解决方案：
优化样本保存和提取条件，减少DNA降解。
使用温和的裂解和纯化条件，避免DNA剪切。
六、A260/A280值异常
1.问题分析：
A260/A280值小于1.8，可能存在蛋白质、酚类等杂质污染。
A260/A280值大于2.0，可能存在RNA污染。
2.解决方案：
重新提取DNA，确保去除蛋白质、酚类等杂质。
在提取过程中加入RNaseA等酶类，去除RNA污染。
七、离心柱堵塞
1.问题分析：
样本中含有大量杂质，导致离心柱堵塞。
离心柱质量不佳或使用不当。
2.解决方案：
预处理样本，去除杂质。
使用高质量的离心柱，并严格按照说明书操作。
八、PCR反应受抑制
1.问题分析：
提取的DNA中含有抑制PCR反应的杂质。
DNA纯度低，含有蛋白质、多糖等杂质。
2.解决方案：
重新提取DNA，确保去除抑制PCR反应的杂质。
提高DNA纯度，去除蛋白质、多糖等杂质。
提取过程中的注意事项
1.样本选择和处理
选择新鲜、高质量的样本。
样本采集后应尽快处理或妥善保存于低温条件下。
2.裂解条件
根据样本类型选择合适的裂解方法和条件。
确保裂解充分，释放DNA。
3.纯化步骤
选择合适的纯化方法和条件。
增加洗涤次数或使用更有效的洗涤方法，确保杂质彻底去除。
4.试剂和耗材
使用高质量的试剂和耗材，避免引入外源酶和杂质。
严格按照说明书操作，避免操作失误。
5.实验环境
保持实验环境整洁、无菌。
避免交叉污染。
