Lipofectamine™ RNAiMAX转染是一种常用的实验技术,主要用于将siRNA和miRNA递送至细胞中以进行基因沉默实验。以下是对Lipofectamine™ RNAiMAX转染的详细介绍:
一、概述
Lipofectamine™ RNAiMAX是一种专有的RNAi特异性阳离子脂肪制剂,专为将siRNA和miRNA递送至所有细胞类型而设计。该转染试剂以其出色的转染效率、低细胞毒性和广泛的细胞兼容性而著称,成为高通量siRNA转染的理想选择。
二、主要特点
1.高效转染:Lipofectamine™ RNAiMAX转染试剂能够提供极高的转染效率,且所需RNAi浓度更低,从而实现更有效的基因敲低。
2.低细胞毒性:在转染试剂的10倍浓度范围内,细胞毒性极轻微,有助于实验的顺利进行。
3.广泛兼容性:与多种细胞类型兼容,包括已建立的细胞系、干细胞、原代细胞和难转染细胞,为各种基因沉默实验提供通用方法。
4.简单快速:转染过程简单快速,可获得一致且可重现的结果。
三、应用
Lipofectamine™ RNAiMAX转染试剂主要用于siRNA介导的基因敲低实验,通过转染将siRNA导入细胞,特异性地沉默目标基因的表达,从而研究基因功能或进行药物筛选等实验。
四、转染步骤(以反向转染为例)
1.准备试剂和细胞:准备Opti-MEM培养基、Lipofectamine™ RNAiMAX试剂、siRNA等转染所需试剂,并确保细胞密度达到转染要求(如≥90%)。
2.细胞处理:将长满的细胞经过胰酶消化离心后去上清,用无双抗的10%FBS培养基重悬细胞,并根据细胞生长速度铺板,保证转染后24小时细胞密度达到30-50%。
3.制备转染复合物:按照说明书要求,将Opti-MEM培养基、siRNA和Lipofectamine™ RNAiMAX试剂依次加入到一个无菌Ep管中,轻轻混匀后室温孵育20分钟。
4.转染:将转染复合物加入细胞培养皿中,轻轻混匀后放入细胞培养箱内。
5.后续处理:转染后24小时内避免挪动细胞或进行换液,转染后48小时可观察细胞形态并进行换液等后续处理。
五、注意事项
1.试剂保存:Lipofectamine™ RNAiMAX试剂应储存在2-8°C下,切勿冷冻。
2.操作细节:在制备转染复合物时,应按照说明书要求操作,避免产生气泡或剧烈混匀。
3.细胞状态:确保细胞在转染前处于良好状态,以提高转染效率。
4.安全性:转染过程中应遵守实验室安全规定,避免试剂溅出或吸入。
总之,Lipofectamine™ RNAiMAX转染试剂以其高效、低毒、广泛兼容性和简单快速的特点,在基因沉默实验中发挥着重要作用。通过遵循正确的操作步骤和注意事项,可以确保实验的顺利进行并获得可靠的结果。