分析型超速离心(AUC)实验服务是一种高级的生物物理分析技术,广泛应用于生物大分子如蛋白质、核酸等的性质表征及相互作用研究中。以下是对分析型超速离心(AUC)实验服务的详细介绍:
一、技术概述
分析型超速离心技术(Analytical Ultracentrifugation, AUC)是一种检测生物大分子溶液中性质的经典技术。它利用沉降速率(Sedimentation Velocity, SV)和沉降平衡(Sedimentation Equilibrium, SE)方法,通过紫外/可见光、干涉光以及荧光检测器来记录样品池中生物大分子径向浓度分布,从而获取分子的分子量、纯度、聚集状态以及生物分子间相互作用等信息。
二、实验原理
AUC 技术的基本原理是在高速旋转产生的强大离心力作用下,分子量或构型不同的分子在溶液中的沉降系数不同,从而呈现出不同的沉降速度和浓度分布特性。分析超离的检测系统会实时扫描分子在离心过程中的沉降过程,对样品的超速离心分离过程实现了“可视化”的实时检测,并根据扫描所取得的数据计算出分子的特性。
三、实验方法
AUC 的分析方法主要有沉降速率(SV)和沉降平衡(SE)两种:
1.沉降速率(SV):
原理:样品被高速旋转,溶质分子向样品池底部移动最终沉降到样品池底部,通过记录的数据来测定溶质分子运动的速率。
应用:SV 是大多数 AUC 应用的首选方法,特别适用于分析蛋白质、核酸、病毒等生物大分子的聚集、相互作用、样品的多分散性及空壳率等。
可获取参数:沉降系数(s)、扩散系数(D)、相对分子量(M)、聚集状态、化学计量比、摩擦系数比(f/f0)等。
2.沉降平衡(SE):
原理:通过适中的转速,产生与样品分子扩散相平衡的离心力,最终使处于平衡状态的样品呈一定的浓度分布,通过对该分布曲线拟合计算得到样品平均分子量。
应用:SE 实验可用于研究大分子与大分子、大分子和小分子配体或金属离子之间的相互作用。
可获取参数:绝对分子量、聚集状态、稳定复合物结合状态、结合/解离常数等。
四、实验服务内容
AUC 实验服务通常包括但不限于以下内容:
1.样品准备:确保样品浓度、纯度及缓冲液条件符合实验要求。
2.实验操作:进行沉降速率(SV)或沉降平衡(SE)实验,记录实验数据。
3.数据处理:利用专业软件(如SEDFIT)对实验数据进行处理分析,获取分子特性参数。
4.结果解读:根据实验结果,解读分子性质、相互作用等信息,并为客户提供专业报告。
五、技术优势
1.无需标记或固定:在原始溶液中测定,接近生理条件,假阴/阳性低。
2.数据精确:分辨率高,结果可重复性高。
3.适用范围广:可用于自聚集和多位点相互作用系统测定,分析范围广(几百至几兆道尔顿)。
4.无损检测:检测过程不破坏样本,样本可回收再利用。
六、应用领域
AUC 技术在生物制药、生物技术、材料科学等领域具有广泛应用,可用于蛋白质、核酸、病毒、纳米颗粒等大分子的性质表征及相互作用研究。例如,在生物制药领域,AUC 可用于蛋白质药物的质量控制、稳定性评估及相互作用研究等方面。