操作流程
细胞冻存步骤
1. 确保细胞处于对数生长期，常规方法将细胞悬浮液收集于离心管中。
2. 根据细胞密度和冻存管尺寸确定所需冻存细胞数量。将细胞悬浮液置于离心管中，200×g（贴壁细胞）或150×g（悬浮细胞），5分钟离心后除去上清液，收集细胞沉淀。
3. 在离心管中加入少量中乔新舟细胞冻存液，细胞浓度约为5×104-1×106/μl，轻轻地混匀细胞，制成细胞悬液。
4. 在冻存管中加入10 μL细胞悬液，再加入990 μL细胞冻存液，轻轻混匀。
5. 将冻存管置于37 ℃培养箱中孵育一小时。
6. 孵育完成后，冻存管冷却至室温，直接放入-80℃超低温冰箱中。
7. 如需在液氮中长期保存，可以在-80℃冰箱中放置一天后转移至液氮罐中。
细胞复苏步骤
1. 将细胞冻存管从超低温环境中取出，立即放入37℃水域槽中快速解冻。
2. 待细胞混合液完全解冻后，立即加入适量细胞培养基混匀。
3. 将细胞混合液移至培养瓶中。镜检后，可根据需求进行细胞的常规化培养。
4. 培养2-5天后，将混合液移至离心管中进行离心，200×g（贴壁细胞）或150×g（悬浮细胞），5分钟离心除去上清液，收集细胞沉淀，重新分散于细胞培养基中。
