生物反应器培养HEK293细胞的步骤与方法通常包括以下几个关键环节：
一、前期准备
1.生物反应器选择：
根据实验需求，选择适合的生物反应器类型，如搅拌式生物反应器、气升式生物反应器等。
2.培养基配制：
选用适宜的HEK293细胞培养基，如DMEM、MEM等。
添加适量的血清（如胎牛血清FBS）、抗生素等成分，以支持细胞的生长和增殖。
注意无血清培养法的应用，即在培养基中不添加血清，而是使用替代物如血小板裂解物、血清替代物等，以提高重组蛋白的纯度和安全性。
3.细胞准备：
将HEK293细胞从冻存管中复苏，并进行传代培养，确保细胞活力在90%以上。
对于悬浮培养，可能需要进行细胞的悬浮驯化，以适应无血清悬浮培养条件。
4.生物反应器清洗与消毒：
将生物反应器内胆清洗干净，用70%酒精消毒，再用无菌水冲洗干净。
确保生物反应器的无菌状态，以避免细胞污染。
二、细胞接种与培养
1.细胞接种：
将配制好的培养基加入生物反应器内胆，确保无气泡。
将准备好的HEK293细胞悬液接种至生物反应器中，接种密度一般为2×10^6个/mL。
2.设置生物反应器参数：
温度：设置为37℃，以维持细胞的正常生理功能。
pH值：控制在7.2~7.4范围内，以维持细胞的酸碱平衡。
溶氧：保持在30%~50%的水平，以满足细胞的呼吸需求。
搅拌速度：根据生物反应器型号和细胞需求进行调整，以确保细胞在反应器中均匀分布并充分接触培养基。
3.实时监测与调整：
通过生物反应器的在线监测系统，实时观察细胞生长状况、溶氧、pH等参数。
根据实际情况调整生物反应器的参数，如补充新鲜培养基、调节搅拌速度等。
4.补料：
根据细胞生长情况，定期补充新鲜培养基，以维持细胞生长所需的营养和环境。
注意流加培养法的应用，即在培养过程中根据细胞对营养物质的消耗和需求，流加浓缩的营养物，以进一步提高悬浮培养的细胞密度。
三、细胞收获与处理
1.细胞收获：
当细胞密度达到预期值（一般为1~2×10^7个/mL）时，停止搅拌。
将细胞悬液从生物反应器中取出，并使用离心机将细胞沉淀。
去除上清液，得到细胞沉淀物。
2.细胞处理：
根据实验需求，对细胞进行冻存或进一步处理。
如进行基因转染、细胞裂解、蛋白质提取等操作。
四、注意事项
1.无菌操作：在整个培养过程中，必须严格遵守无菌操作规范，以避免细胞污染。
2.参数优化：根据细胞类型和实验需求，优化生物反应器的参数设置，以提高细胞培养效率和产物质量。
3.监测与记录：实时监测并记录细胞生长状况、培养基成分变化等关键参数，以便及时发现问题并采取措施。
4.设备维护：定期对生物反应器进行清洗、消毒和维护，以确保其正常运行和延长使用寿命。
综上所述，生物反应器培养HEK293细胞需要严格遵循一系列步骤和方法，包括前期准备、细胞接种与培养、细胞收获与处理以及注意事项等方面。通过精细的管理和操作，可以实现HEK293细胞的高效培养和产物的稳定生产。
