四唑盐（MTT）比色法是一种常用于细胞活力检测的经典方法，其检测原理主要基于活细胞线粒体中的酶促反应。以下是该方法的详细原理：
一、MTT的化学结构与活性
MTT，全名3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐，是一种黄色的四唑盐。它本身是一个非极性分子，不能直接溶于水，但在不含酚红的培养液或0.01 mol/L PBS中可以溶解并呈现黄色。
二、细胞代谢还原作用
在活细胞中，尤其是有线粒体活性的细胞内，MTT会被还原为紫色的甲臜（formazan）。这一还原过程由细胞内的线粒体还原酶（如NAD(P)H-依赖的脱氢酶）催化。细胞通过其代谢活性将MTT转化为紫色的formazan，这一反应是MTT比色法的核心。活细胞的数量和代谢活性越高，转化为formazan的数量就越多。
三、形成紫色formazan结晶
还原后的formazan是紫色的，它在细胞内通常以结晶的形式存在。这个紫色结晶是不溶于水的，但可以通过溶解溶剂（如二甲基亚砜DMSO）来溶解。溶解后的formazan溶液可以用于后续的吸光度测量。
四、测量吸光度
使用分光光度计或酶联免疫检测仪，在特定波长（如490nm或570nm）下测定formazan溶液的吸光度值（OD值）。吸光度值与细胞的代谢活性呈正相关，即细胞活力越高，紫色formazan生成越多，吸光度值也越高。
五、应用与特点
MTT比色法具有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速且无放射性污染等优点。它广泛应用于细胞增殖、细胞毒性及药物筛选等生物医学研究中。然而，由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测，这不仅增加了工作量，也可能对实验结果的准确性产生影响。此外，溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有潜在的损害。
六、注意事项
1.MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
2.在实验过程中，需要严格控制实验条件，如温度、pH值、细胞接种密度等，以确保实验结果的准确性。
3.对于某些细胞类型或特殊的实验条件，可能会出现干扰因素（如细胞培养基中的成分、药物或其他物质的吸光干扰），需要采取相应的措施进行校正或优化实验条件。
综上所述，四唑盐（MTT）比色法通过测量活细胞将MTT还原为紫色formazan的能力来反映细胞的活力和增殖情况。该方法简单、灵敏且广泛应用于生物医学研究中。
