抗体，都不陌生，是包括Western Blot、ELISA、IHC、IF、FC等在内的，生物学实验中必不可少的核心试剂，抗体能否良好的工作，直接决定了实验结果的好坏。

怎样才能取得漂亮的高特异性的免疫检测实验结果呢？相信这是所有奋战在科研都关心的一个问题。优质的抗体是解决这一问题的核心条件之一，高质量的抗体，特异性好，效价高，容易得到好的实验结果，但是，是不是买到了高质量的抗体，就一劳永逸，随便做做也可以得到好的结果呢？并不是那么简单，整个实验过程中的各个步骤都会对实验结果产生影响，提高自己的实验技术，严格按照实验操作流程操作也是必不可少的。

在这里，分享一个比较容易被大家忽视的点，也对实验结果有着比较重要的影响，那就是抗体稀释液。常做实验的同学们都知道，买来的抗体都是高浓度的储存液（也有冻干粉形式，需要重溶，重溶后也是以高浓度储存液的方式储存），根据不同的实验需求，需要按比例稀释至工作浓度，再进行实验，而通常来讲，抗体厂家的说明书一般只提供了对应的稀释比例，至于用什么来进行稀释，并没有提到，于是往往都是按照实验室的口口相传或者网上查来的配方来进行配制，稀释液也是五花八门，林林种种。至于实验究竟适合用什么样的抗体稀释液，或者用的稀释液配方适不适合的实验，并不是十分清楚。

如何根据实验选择抗体稀释液呢？首先，要弄清楚抗体稀释液的作用有哪些。

总结起来，抗体稀释液最主要的作用有三点：

第一，缓冲体系，为抗体提供稳定的工作环境（离子浓度，pH等）；

第二，保护体系，长时间保持抗体稳定，防止抗体在低浓度下效价降低；

第三，封闭体系，辅助提高抗体特异性，减少非特异结合。不同的实验，对于以上三点需求各有侧重，所以抗体稀释液的配制也是有区别的。接下来以几种常用的实验来举例，详细说说该如何选择抗体稀释液。

WB，半定量检测蛋白表达的常用实验技术，利用电泳将不同分子量的蛋白分开，并转膜到蛋白亲和材料上后，利用特异性抗体来检测目的蛋白表达。由于抗体用量较大（一般是1-10ml工作液），且实验频次较高，往往需要抗体回收，多次利用。按照上面介绍过的三点，缓冲需求，一般采用PBS或TBS体系即可；保护体系则应更为侧重，通常需要用到BSA、明胶等多种载体蛋白，来提高整个体系中的蛋白浓度，防止抗体在低浓度下效价降低，为了回收使用的需求，还需加入NaN3等防腐剂成分，抑制微生物生长，延长抗体保存时间；封闭体系则较弱，因为WB的基质材料（NC膜或PVDF膜）较为简单，并且在抗体孵育前，需要进行封闭步骤，降低非特异亲和，缓冲液中的BSA等载体蛋白成分已可达到封闭需求，无需额外添加。在此，再强调两点，WB实验，如果检测的目的蛋白为磷酸化蛋白，整个实验体系应采用Tris缓冲体系，抗体稀释液也应采用TBS体系，不要使用PBS体系；二抗如果使用HRP标记的二抗，稀释液则应避免使用NaN3作为防腐剂。

IHC，原位检测蛋白表达的实验技术，也是病理实验中最常用的实验技术。在IHC实验中，抗体稀释液的需求又有不同，缓冲体系和WB类似，PBS和TBS均可；保护体系则无需特别注意，因为通常来讲，IHC实验为节约抗体，采用组化笔圈住目的组织来进行，而抗体则无需回收；封闭体系更为侧重，组织成分更为复杂，非特异亲和更多，虽然经过封闭处理，抗体孵育步骤仍需注意采用封闭效应较好的稀释液，除BSA等蛋白外，还应含有5%左右的一抗来源同种属血清（通常为山羊或驴，根据一抗种属选择），降低抗体非特异结合导致的假阳性及背景杂信号。