一、DAPI荧光染料介绍:
DAPI (28718-90-3,DAPI Dihydrochloride)是一种荧光 DNA 染料,可与双链 DNA 的小沟结合,优先选择富含腺嘌呤和胸腺嘧啶 (AT) 的 DNA。
DAPI 常用于显微镜和流式细胞术。 DAPI 可用于固定细胞或活细胞,尽管它在活细胞中的跨膜效率较低并且需要使用更高的浓度。
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二、DAPI染液使用方法:
1. 用1mL 的 ddH2O 将 DAPI进行溶解,制成为: 2.9mM 的 DAPI溶液(1mg DAPI:1mL H2O)。
备注:DAPI 不能直接采用 PBS 等缓冲溶液进行溶解,需要先用水将其溶解。
2. 取适量 DAPI水溶液 加到PBS缓冲液中,制成:10~50µM 的 DAPI溶液, 推荐采用:PBS配制方法: 使用 8.00g,NaCl; 0.20g KCl; 2.9g Na2HPO4·12H2O 以及0.2g KH2PO4溶解于1L纯水中。
3. 将1/10体积培养基的 DAPI溶液 加入细胞培养基中,也可以采用 1/10浓度 的 DAPI缓冲液 替代培养基使用。
4. 在37℃恒温条件下培养细胞约 10~20 分钟之间。
5. 用 PBS 或者 合适的缓冲液洗两次细胞。
6. 用带有 360nm激发波长 和 460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜进行观察细胞。