常用的检测方法有培养法、荧光染色法、PCR法和电镜观察法。
培养法
培养法是最为可靠且成本低廉的方法，但培养周期较长，常用于细胞以及临床治疗细胞的支原体检査；
荧光染色法
荧光染色法是用特异荧光染料（Hoechst 33258）染色后在荧光显微镜下进行检测，荧光染料(Hoechst 33258)是一种能和DNA特异结合物质，如果检测样品为支原体污染，则附在细胞表面和分散在细胞与细胞之间的支原体DNA着色，在荧光显微镜下可见；
PCR法和电镜观察法
PCR法检测是通过对支原体特定的序列设计引物，当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增，会将目标DNA特异性的复制，然后通过琼脂糖电泳观检测，会跑出条带出现阳性结果，反之当没有支原体污染时，由于没有模板，PCR无法扩增，则琼脂糖电泳跑不出条带，出现阴性结果；电镜观察法是利用电子显微镜的超级放大功能，直接观察培养细胞中支原体污染情况。
下面为您介绍利用荧光染色法来检测培养细胞中的支原体。
荧光染色法检测步骤
1.细胞爬片培养：待测细胞培养至传代水平，将细胞消化后接种至含有玻片的细胞板中，培养至60%-70%汇合时，进行检测；
2.漂洗：将细胞板中的培养液吸出，取出玻片，用PBS轻轻漂洗；
3.固定：加入适量的固定液，室温放置10min；
4.漂洗：用PBS轻轻漂洗3次；
5.染色：加入适量的荧光染料（Hoechst 33258）工作液，在室温下放置10min；
6.漂洗：用PBS轻轻漂洗3次；
7.镜下观察：将玻片晾干后，滴加抗荧光猝灭剂，于荧光显微镜下观察、拍照；
8.实验结果如图所示：
只观察到细胞的细胞核，说明细胞没有被支原体的污染
图2
可见细胞核外与细胞表面会出现蓝色萤光小点或是丝状点，其形状各异，与细胞共同被染成不规则的点状物，说明细胞被支原体污染。
