为了获取更可靠的结果，以下是规范的样本制备步骤和注意事项：
1.培养细胞健康：
维持适宜的培养箱条件，如温度、pH和CO2水平，以保持细胞健康。
避免培养箱超载和频繁开门，以减少环境因素对细胞的影响。
保持细胞对数生长期，避免细胞死亡和聚集。
在传代时，避免苛刻的离心，使用温和的分离试剂如Accutase®以减少细胞聚集。
2.细胞浓度检查：
使用自动细胞计数器进行细胞计数，确保实验间样品的一致性。
维持最佳细胞浓度范围，避免因细胞过多或过少影响流式细胞术分析。
3.活性染料的使用：
同时测量细胞浓度和评估细胞活力，监测细胞健康状况。
使用吖啶橙/碘化丙啶（AO/PI）等试剂替代台盼蓝，以减少细胞毒性并兼容自动计数系统。
4.处理的一致性：
保持实验间处理方法的一致性，如药物剂量、酶激活或信号通路诱导。
使用冻干粉状、预先配制的激活剂混合物或自动化液体处理系统以提高重现性。
5.富集稀有细胞群：
当目的细胞群含量低时，采用靶富集方法，如磁珠富集技术。
6.血液和组织样本的处理：
使用专门的组织储存试剂、冷冻干燥和低温保存以降低样本变异性。
机械离解组织，并使用组织特异性离解缓冲液以保留表位。
7.样本过滤：
通过适当孔径的细胞过滤器过滤样本，去除可能堵塞流式细胞仪的团块。
8.防止细胞粘附：
使用不含Ca2+/Mg2+且含有蛋白质的再悬浮缓冲液，加入DNase以清除释放的DNA，减少团块形成。
使用聚丙烯管减少细胞对管壁的结合。
9.免疫染色规划：
精心选择多色免疫染色抗体和设计方案，考虑仪器配置、抗体克隆、抗原表达丰度、染料亮度和相互影响。
利用在线工具如FluoroFinder的光谱查看器和方案生成器，比较荧光色素和设计最佳的多色流式细胞术实验。
